摘要
[目的]采用HPLC法测定棉团铁线莲(Clematishexapetala)根及茎叶中齐墩果酸含量,为进一步开发棉团铁线莲药用资源提供理论依据。[方法]色谱柱为YW-C18柱(4.6mm
150
0mm,5um);流动相为甲醇-水(V：
V=90
10);检测波长为220nm;进样量为10
ul流速为1.0ml/min;柱温为25℃
。[结果]棉团铁线莲根中齐墩果酸的含量为0.1752%,茎叶中齐墩果酸的含量为0.0963%。[结论]该方法简单、快速、准确,可用于棉团铁线莲中齐墩果酸的含量测定;同时该研究为评价棉团铁线莲茎叶的药用价值提供了参考,为进一步开发棉团铁线莲药用资源和质量控制提供了科学依据。

关键词
棉团铁线莲;齐墩果酸;HPLC法

 

棉团铁线莲(Clematishexapetala)别名山蓼、棉花团、山辣椒秧,为毛茛科铁线莲属多年生草质藤本植物,主产于我国黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西、陕西、甘肃东部和山东等地。
中国药典
2005年版将其根及根茎作为威灵仙的正品药材应用,主要用于治疗风湿痹痛、关节不利等症。研究表明,铁线莲属植物中含有多种类型的化学成分,其中主要有效成分为三萜皂苷类,其皂苷元主要为齐墩果酸。目前,对棉团铁线莲根的化学成分研究已有报道,但至今尚未见对其茎叶中化学成分的研究报道。为此,笔者采用HPLC法对棉团铁线莲的根及茎叶中齐墩果酸的含量进行测定,并对测定方法进行研究,以期为进一步开发棉团铁线莲药用资源提供理论依据。

1
材料与方法

1.1
材料

1.1.1
研究对象。棉团铁线莲2009年9月采自吉林通化市,经通化师范学院于俊林教授分类鉴定。

1.1.2
主要试剂。齐墩果酸标准品(批号:110709-200304),由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为市售色谱纯或分析纯;其他试剂均为市售分析纯;超纯水。

1.1.3
主要仪器。Agilent1100型高效液相色谱仪(包括1100四元泵、柱温箱、二级管阵列检测器和Agilent化学工作站),由美国Agilent公司生产;CP225D电子天平,由sartoris公司生产。

1.2
方法

1.2.1
色谱条件。色谱柱为YW-C18柱(4.6mm
150
0mm,5
m);流动相为甲醇-水(V
V=90
10);检测波长为220nm;进样量为10
;l流速为1.0ml/min;柱温为25
。

1.2.2
供试品溶液的制备。将棉团铁线莲采后洗净,阴干,将其根、茎叶分别粉碎过60目筛,备。精密称取棉团铁线莲根、茎叶粉末各5.0g,分别置于具塞容量瓶中,加入30ml乙醚超声处理15min,过滤。在药渣中加入30ml水饱和正丁醇,超声提取15min,过滤,重复2次,合并滤液。分别将滤液置于分液漏斗中,加入2倍量蒸馏水,摇匀,静置分层(取上层),回收浓缩正丁醇层。将正丁醇浓缩物分别加水稀释至50m,l再加入盐酸,使浓度为10%,加热保持微沸30min(保持水分)。酸水解液用等倍量乙酸乙酯萃取3次,回收乙酸乙酯,残渣用甲醇溶解,定容至5m,l即得供试品溶液。

1.2.3
方法学考察。

1.2.3.1
线性关系考察。精密称取齐墩果酸标准品20.5200mg,用甲醇溶解并定容至100ml。分别精密吸取标准液1
0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于10ml的容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,分别进样。以峰面积为纵坐标(y),标准品浓度为横坐标(x)计算回归方程,考察线性关系。

1.2.3.2
精密度考察。精密吸取标准品溶液10ul重复进样5次,测定峰面积,计算得峰面积相对标准偏差(RSD)值。

1.2.3.3
稳定性考察。取棉团铁线莲根药材粗粉按
1.2.2
制备成样品,在室温下保存,分别于第0、2、4、8、12h测定,计算峰面积RSD值。

1.2.3.4
重现性考察。取棉团铁线莲根样品5份,分别按
1.2.1
中色谱条件测定,计算样品中齐墩果酸峰面积RSD值。

1.2.3.5
加样回收率试验。精密称定5.0g棉团铁线莲根样品各5份,分别按供试品溶液方法制备。精密吸取样品液1m,l在每份中加入齐墩果酸标准品0.2052mg/ml各1m,l进样分析,计算平均回收率和RSD值。

1.2.4
样品含量测定。分别取棉团铁线莲根、茎叶供试品溶液进行HPLC测定,进样量均为10
,l平行进样3次,计算齐墩果酸含量。

2
结果与分析

2.1
方法学考察结果

2.1.1
线性关系。由图1可知,齐墩果酸标准品在5~6min出峰,计算得回归方程为y=24208x-126.8,r=0.9991。结果表明,齐墩果酸在0.2052~1.0260mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.1.2
精密度。计算得峰面积RSD值为0.58%,表明仪器精密度良好。

2.1.3
稳定性。计算得峰面积RSD值为0.89%,表明齐墩果酸在12h内稳定。

2.1.4
重现性。计算得RSD值为1.51%,表明样品处理过程和测定方法均有良好的重现性。

2.1.5
回收率。计算齐墩果酸平均回收率为99.8%,RSD值为1.12%。

2.2
样品测定结果
棉团铁线莲根、茎叶中齐墩果酸测定结果如图2、3所示。计算得棉团铁线莲根中齐墩果酸的平均含量为0.1752%,茎叶中齐墩果酸的平均含量为0.0963%。

3
结论与讨论

齐墩果酸为棉团铁线莲所含的主要皂苷元,其含量的测定在一定程度上能反映药材的质量。研究表明,不同产地的棉团铁线莲中齐墩果酸的含量也不同,河北产的棉团铁线莲齐墩果酸含量较高,辽宁产的较低。该试验结果表明,吉林通化地区所产的棉团铁线莲齐墩果酸含量也较低,其中棉团铁线莲的茎叶中齐墩果酸含量略低于根。该测定方法操作简单、灵敏、重现性好,可用于棉团铁线莲中齐墩果酸的含量测定。该研究为评价棉团铁线莲茎叶药用价值提供了参考,为进一步研究开发其药用资源和质量控制提供了科学依据。